TÓM TẮT VÀ GIẢI THÍCH BÀI KIỂM TRA
Sốt rét là một bệnh sốt, tan máu, do muỗi truyền, lây nhiễm cho hơn 200 triệu người và giết chết hơn 1 triệu người mỗi năm.Nó được gây ra bởi bốn loài Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale và P. malariae.Tất cả các plasmodia này lây nhiễm và phá hủy hồng cầu của con người, tạo ra ớn lạnh, sốt, thiếu máu và lách to.P. falciparum gây bệnh nghiêm trọng hơn các loài ký sinh trùng khác và gây ra hầu hết các trường hợp tử vong do sốt rét.P. falciparum và P. vivax là những tác nhân gây bệnh phổ biến nhất, tuy nhiên, có sự khác biệt đáng kể về mặt địa lý trong phân bố loài.
Theo truyền thống, bệnh sốt rét được chẩn đoán bằng cách chứng minh các sinh vật trên vết máu ngoại vi dày được nhuộm Giemsa, và các loài plasmodium khác nhau được phân biệt bằng sự xuất hiện của chúng trong hồng cầu bị nhiễm1.Kỹ thuật này có khả năng chẩn đoán chính xác và đáng tin cậy, nhưng chỉ khi được thực hiện bởi các nhà kính hiển vi lành nghề sử dụng các giao thức xác định2, điều này gây ra những trở ngại lớn cho các khu vực xa xôi và nghèo khó trên thế giới.
Bộ xét nghiệm nhanh kháng nguyên sốt rét Pf / Pan được phát triển để giải quyết những trở ngại này.Xét nghiệm sử dụng một cặp kháng thể đơn dòng và đa dòng với protein đặc hiệu của P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II), và một cặp kháng thể đơn dòng với plasmodium Lactate Dehydrogenase (pLDH), một loại protein được sản xuất bởi bốn loài plasmodium, do đó cho phép phát hiện và phân biệt đồng thời tình trạng nhiễm P. falciparum và hoặc bất kỳ trong số ba loại plasmodia khác.Nó có thể được thực hiện bởi nhân viên chưa được đào tạo hoặc có kỹ năng tối thiểu, không có thiết bị phòng thí nghiệm.
NGUYÊN TẮC
Bộ kit Pf/Pan Malaria Rapid Test là một xét nghiệm miễn dịch sắc ký dòng chảy bên.Các thành phần của que thử bao gồm: 1) một miếng liên hợp màu đỏ tía có chứa kháng thể kháng pHRP-II của chuột được kết hợp với vàng dạng keo (liên hợp vàng pHRP II) và kháng thể kháng pLDH của chuột được kết hợp với vàng keo (liên hợp pLDH-vàng),
2) dải màng nitrocellulose chứa hai dải thử nghiệm (dải Pan và Pv) và dải đối chứng (dải C).Dải Pan được phủ trước bằng kháng thể đơn dòng kháng pLDH nhờ đó có thể phát hiện sự lây nhiễm với bất kỳ loài nào trong số bốn loài plasmodia, dải Pf được phủ trước bằng kháng thể đa dòng kháng pHRP-II để phát hiện nhiễm trùng Pf và dải C được phủ IgG chống chuột của dê.
Trong quá trình xét nghiệm, một lượng mẫu máu thích hợp được phân phối vào giếng mẫu (S) của băng xét nghiệm, dung dịch đệm ly giải được thêm vào giếng đệm (B).Bộ đệm chứa chất tẩy rửa làm ly giải các tế bào hồng cầu và giải phóng các kháng nguyên plasmodium khác nhau, các kháng nguyên này di chuyển theo tác động mao dẫn qua dải được giữ trong băng cassette.pHRP-II nếu có trong mẫu vật sẽ liên kết với liên hợp pHRP II-vàng.Phức hợp miễn dịch sau đó được bắt giữ trên màng bởi các kháng thể kháng pHRPII được phủ sẵn, tạo thành một dải Pf có màu đỏ tía, cho thấy kết quả xét nghiệm dương tính với Pf.pLDH nếu có trong mẫu vật sẽ liên kết với các liên hợp vàng pLDH.Phức hợp miễn dịch sau đó được kháng thể kháng pLDH phủ sẵn bắt giữ trên màng, tạo thành dải Pan màu đỏ tía, cho thấy kết quả xét nghiệm dương tính với plasmodium.Trong trường hợp không có dải Pan, có thể khuyến nghị kết quả xét nghiệm dương tính với bất kỳ loại nào trong số ba loại plasmodia còn lại.
Không có bất kỳ dải thử nghiệm nào (Pan và Pf) cho thấy kết quả âm tính.Xét nghiệm chứa một chất kiểm soát nội bộ (dải C) sẽ thể hiện một dải màu đỏ tía của phức hợp miễn dịch IgG kháng chuột của dê/IgG của chuột (các chất kết hợp pHRP-II và pLDH-vàng) bất kể sự phát triển màu sắc trên bất kỳ dải thử nghiệm nào.Nếu không, kết quả xét nghiệm không hợp lệ và mẫu xét nghiệm phải được xét nghiệm lại bằng thiết bị khác.
